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要用顯微鏡在高倍鏡下檢查樣品，有許多因素需要考慮，其中包括分辨率、數(shù)值孔徑（NA）、物鏡的工作距離，以及物鏡前透鏡采集圖像所用介質(zhì)的折射率。我們通過這篇文章簡要地看一下如何在蓋玻片和物鏡前透鏡之間利用鏡油幫助提高NA和分辨率，提高成像質(zhì)量。
什么是鏡油？
在物鏡前透鏡和標(biāo)本蓋玻片之間的空隙中填充浸沒液體可提高物鏡的分辨率。通過使用折射率接近的油，可以減少光的散射和折射，提高成像的清晰度和分辨率。空氣的折射率為1.0，而顯微鏡載玻片和蓋玻片的折射率通常為1.5。考慮到這一差異，浸泡液體的目的是匹配（盡可能接近）玻片的折射率，從而增加形成最終圖像的光線量。大多數(shù)浸油的折射率為1.51。常見折射率見表1。
為什么要用鏡油？
通常鏡油提高成像質(zhì)量主要通過以下幾個方面：
1
增加分辨率
當(dāng)光從樣品通過蓋玻片進(jìn)入物鏡時，如果中間存在空氣，它會發(fā)生折射和散射，從而降低成像質(zhì)量。鏡油的折射率與玻璃蓋玻片和物鏡的折射率相似，使用鏡油可以減少光的折射和散射，提高圖像的分辨率。
2
提高光的收集能力
鏡油可以增加物鏡的數(shù)值孔徑（NA），即物鏡收集光的能力。數(shù)值孔徑越高，顯微鏡的分辨率和成像質(zhì)量就越好。
3
減少光損失
鏡油可以減少由于反射和散射引起的光損失，使更多的光線進(jìn)入物鏡，從而提高圖像的亮度和對比度。
4
減少光學(xué)偽影
在高倍顯微鏡觀察時，使用鏡油可以減少由光折射和反射引起的光學(xué)偽影，使得圖像更加清晰。
哪些物鏡需要使用鏡油
以下圖為例，物鏡上標(biāo)識的“100X/1.25 OIL"，指100倍放大倍數(shù)，NA=1.25，“OIL"指需要使用鏡油。
選擇鏡油的參考因素
在選擇鏡油時，需要考慮以下幾個因素：
折射率：選擇折射率與蓋玻片和物鏡相匹配的鏡油，以減少光的折射和散射。
粘度：鏡油的粘度應(yīng)適中，以確保在使用過程中能夠均勻涂抹，不易形成氣泡。
化學(xué)相容性：選擇與顯微鏡和樣品材料相容的鏡油，避免化學(xué)反應(yīng)導(dǎo)致的損壞。
自發(fā)熒光：對于熒光顯微鏡應(yīng)用，應(yīng)選擇低自發(fā)熒光的鏡油，以避免影響成像質(zhì)量。
徠卡guan方建議使用的原廠鏡油
可供選擇的鏡油有多種，下面兩種常用的點擊鏈接可以直達(dá)商城采購：
1
Type F Immersion Liquid
徠卡guan方貨號：11513859
10ml
23℃折射率 1.5180
嚴(yán)格根據(jù)ISO 8036制造，保證成像質(zhì)量，廠家推薦的鏡油
超低自發(fā)熒光，提升信噪比，適用熒光應(yīng)用
適用于APO油鏡，以完成最佳成像
2
Type N Type N Immersion Liquid
徠卡guan方貨號：11513860 (20ml) 和11513861 (250ml)
嚴(yán)格根據(jù)ISO 8036制造
低端應(yīng)用可以使用
兩種容量規(guī)格
如何使用鏡油？
以配置5X 10X 20X 40X干鏡和100X油鏡為例，從使用低倍物鏡5X-10X查看樣本開始，在樣品上找到感興趣的區(qū)域。
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逐步切換至40X物鏡并均調(diào)至焦面。
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通過物鏡轉(zhuǎn)盤（物鏡的連接底座）在40x和100x物鏡之間切換但不要直接接觸高倍物鏡。
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從顯微鏡的一側(cè)看去，小心地將1滴鏡油直接滴到蓋玻片上。將高倍物鏡擺入到位（繼續(xù)從一側(cè)觀察載物臺），先粗調(diào)然后微調(diào)對焦，讓物鏡前透鏡與鏡油發(fā)生接觸。有些油浸物鏡的前透鏡是凹面的，這意味著還應(yīng)該在物鏡上滴一滴油以防止氣泡被困在凹透鏡中。
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然后可以再次通過目鏡觀察。僅使用微調(diào)對焦來調(diào)整視野。雖然高倍物鏡含有彈簧加載式轉(zhuǎn)換器，但在這個階段粗聚焦很容易導(dǎo)致蓋玻片或載玻片破裂，也可能損壞物鏡前透鏡。
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即便您計劃觀察其他載玻片，也應(yīng)在此階段清除物鏡上的鏡油以防止可能污染顯微鏡的其他部分。對于不適合浸沒的顯微鏡部件和物鏡，鏡油會滲透并造成損壞。用擦鏡紙在鏡片上擦一次，去除多余的油。每次擦拭都要用干凈的擦鏡紙擦拭物鏡前透鏡，直到?jīng)]有殘留油的痕跡。可使用除油溶液或少量二甲苯最終清潔透鏡。同樣，在對透鏡應(yīng)用任何溶液之前，請務(wù)必仔細(xì)了解物鏡制造商的建議。
此外，建議在使用鏡油時注意以下幾點：
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選擇合適的鏡油：根據(jù)顯微鏡制造商的建議選擇合適的鏡油，確保其與顯微鏡和樣品的材料相容。
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正確使用：在使用鏡油時，注意避免夾帶空氣，涂抹均勻。
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及時清潔：使用后及時用鏡頭清潔紙和合適的溶劑清潔物鏡，確保沒有鏡油殘留。
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定期維護(hù)：定期檢查和維護(hù)顯微鏡，確保所有部件的清潔和正常運行。
更多關(guān)于徠卡顯微鏡使用和維護(hù)保養(yǎng)的使用注意事項，可以留言與徠卡服務(wù)工程師取得聯(lián)系。
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