上一期介紹了Leica的科學(xué)家們利用新一代Power HyD S檢測(cè)器與二代白激光，掙脫金字塔的束縛。然而，僅在這四個(gè)頂點(diǎn)上的不斷探索，似乎并不能*復(fù)刻真實(shí)。于是科學(xué)家們提出了一個(gè)新的方向——功能成像。

為了實(shí)現(xiàn)功能成像，我們?cè)谥暗某上窕A(chǔ)上引入一個(gè)嶄新的維度——熒光壽命成像。

以往，提到熒光壽命成像，對(duì)于生物學(xué)家來說可謂是愛悠悠恨悠悠，愛它能提供更多維度信息，恨他操作困難。不僅需要采購一整套FLIM相關(guān)設(shè)備，還要系統(tǒng)學(xué)習(xí)FLIM的理論知識(shí)和專業(yè)FLIM軟件模塊的算法。

經(jīng)過多年的不斷迭代，2018年，Leica推出了高度集成的高速熒光壽命成像FALCON(FAst Lifetime CONtrast)。為了將功能成像帶給更多的用戶，我們?cè)?/span>STELLARIS平臺(tái)搭載了基于熒光壽命的TauSense模塊，使得您更易獲得熒光分子的熒光壽命相關(guān)信息。畢竟，無論實(shí)驗(yàn)樣品的制備流程如何，熒光壽命的信息一直存在。結(jié)合熒光光譜強(qiáng)度信息，可以同步獲得更精準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)信息和功能信息。

首先，我們來看一下TauSense給大家?guī)碓鯓拥臒晒鈮勖畔ⅰ?/span>

（圖一）中可以看到，熒光分子的光譜信息和熒光壽命是相互獨(dú)立的。這就意味著，即使熒光光譜相似，熒光分子也有可能不一樣。因此可以通過熒光壽命的不同來區(qū)分熒光光譜相近的熒光分子。

基于此特性，就有可能將原本熒光光譜疊加的熒光分子區(qū)分開來（圖二）。原本通過光譜特性區(qū)分出的兩通道熒光信息，借助熒光壽命的差異，就進(jìn)一步拆分出了四個(gè)獨(dú)立通道。除此之外，由于熒光壽命并不會(huì)受熒光強(qiáng)度和光淬滅的影響，因此利用熒光壽命來進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的功能成像結(jié)果更準(zhǔn)確。比如進(jìn)行鈣震蕩成像時(shí)，主要觀察鈣離子濃度升高和降低的趨勢(shì)，從圖三可以看出恢復(fù)靜息狀態(tài)之后，鈣離子的熒光壽命與剛開始比較，幾乎沒有變化。

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